組織RNA提取的操作注意事項你知道有哪些么?今天就讓我們一起來了解一下吧。
由于rna酶的廣泛存在與難以滅活的頑固特性。使得RNA的提取純化和后續工作變得非常困難。為了保證RNA的研究工作成功,請仔細閱讀下列注意事項,相信它能幫助您解決常見的問題。
歸根究底,RNA工作的主要問題是防止RNA酶的污染。RNA酶無處不在,在實驗操作的任何一步,任何偶然的疏忽或不當操作都有可能造成RNA酶污染,從而導致整個實驗失敗。因此,嚴格控制實驗條件,避免任何可能的污染是保證實驗成功的關鍵,必須做到以下幾點:
1.如果可能,實驗室應辟出專門RNA操作區,離心機、移液槍、試劑等均應專用。RNA操作區應保持清潔,并定期進行消毒。
2.操作過程中應自始至終佩戴拋棄式橡膠或乳膠手套,并經常更換,以避免將手、臂上的細菌和真菌以及人體自身分泌的RNA酶帶入試管或污染用具。盡量避免使用拋棄式塑料手套。塑料手套不貼身,常常造成操作不便,而且多出部分還容易在器具上遭RNA酶污染并向未污染處傳遞,擴大污染。
3.盡量使用一次性槍頭、離心管等塑料制品,盡量避免與其它實驗共享器具,以防止交叉污染。推薦使用出廠前已經滅菌的槍頭和離心管,大多國外廠商供應的無菌塑料制品很少有RNA酶污染,買來后可直接用于RNA操作。許多研究者用DEPC等處理的塑料制品,往往由于二次污染而帶有RNA酶,從而導致實驗失敗。
4.配制溶液用的酒精,異丙醇、Tris等應采用未開封的新品。溶液需用DEPC水配制(加0.01%(體積比)DEPC至重蒸水或Mili Q級水中,處理過夜,滅菌即成DEPC水)。
5.所有玻璃制品都必須在240℃烘烤4小時。所有舊塑料制品都必須用0.5M的NaOH處理10分鐘,并用DEPC-H2O徹底沖洗后滅菌,也可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜,然后滅菌,烘干。無法用DEPC處理的用具可以用氯仿擦拭若干次,這樣通??梢韵齊NA酶的活性。