
樣本核酸提取
英文名稱:Column Viral RNAOUT
運輸:常溫
保存:常溫
有效期:1年
貨期:現貨
其他:
產品介紹:
高效柱式病毒RNA純化
樣本核酸提取產品特點
本產品是在一管式病毒 RNA提取試劑盒 的基礎上開發的、專門用于
從血清(血漿)等液體樣品中提取微量病毒 RNA 的產品,它具有下列特點:
1. 操作簡單,整個過程只需要 20 分鐘左右,不需要額外在洗柱液中補加
乙醇。
2. 靈敏度高,通過 RT-PCR 檢測到的終靈敏度可以達到 50 拷貝/mL。
3. 安全無毒,不需要使用苯酚
等有機溶液。
4. 如果加上病毒離心富集步驟,多可以處理 1.5 mL 液體病毒樣品。
5. 與 RT-PCR 和熒光 RT-PCR 兼容。
6. 價廉物美,性價比遠低于國外同類產品。
7. 適用于各種材料,包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養細胞
上清液等無細胞材料。
運輸及保存 常溫運輸和保存,RNA 病毒裂解液長期(1 周)放置需放 4℃,有效期一
年。
自備試劑 無
使用方法 1. 如果有 N 個樣品,標記 N+2 個 1.5-2 mL 螺旋蓋塑料離心管(如
Sarstedt CAT#:782.694.006),多出的一個為陽性對照,一個為陰性
對照。為避免污染,建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個管上做
個標記,以在后續操作時區別向心面和離心面。然后各加入 0.2 mL
液體樣品(血清、血漿、尿液、腦脊液、唾液、眼淚等等)。
1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各種拭子樣品,則將拭子放入
0.2mL 自備生理鹽水中擠壓出液體,然后取 0.2mL 進行提取。
1.2、 如果是糞便等半固定樣品,則取約 0.3mL 的樣品,加入 0,3
自備生理鹽水,震蕩重懸,離心取 0.2mL 上清進行提取。
1.3、 如果血液,細胞培養液等含細胞的液體,可以離心用上清,也
可以直接取用,但后者提取的 RNA 中有細胞的基因組 DNA 污
染。血漿的抗凝劑必須是 EDTA 或 ACD,不能是肝素。使用
ACD 時由于所加入 ACD 會增加體積,樣品會被稀釋,得到的
病毒滴度會比使用 EDTA 低 15%左右。血漿按 0.6mL/
管的量分裝保存,以避免反復凍融。
1.4、 如果樣品是實體組織或培養細胞,則需要在自備生理鹽水中勻
漿后離心,用 0.2mL 上清液(含病毒)進行提取,但此種情
況下后得到的 RNA 不可避免的會含有基因組 DNA 污染。
1.5、 如果液體樣品中的病毒需要富集,可以使用 1.5 mL 上述方法
得到的液體在 4℃ 24,000 g 冷凍離心 60 分鐘, 移棄 1.3 mL、
用剩下的 0.2mL 繼續操作。
2. 加入 0.6 mL RNA 病毒裂解液,振蕩 30 秒混勻后室溫放置 10 分鐘。
注意:RNA 病毒裂解液在 4℃放置后可能會產生沉淀,使用前必須放
在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 加入 0.8mL 上柱結合液到離心管中,顛倒混勻后轉移一半的混合液
(0.8 mL)到離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘。
4. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱
放回到收集管中。
5. 將剩余的另外一半裂解液(0.8mL)轉移到離心吸附柱中,室溫放置 2
分鐘。
6. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱
放回到收集管中。
7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12,000 rmp 室溫離心 1
分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集管中。
8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12,000 rmp 室溫離心 1
分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集管中。此為第
二次洗滌,可以跳過。
9. 12000 g 室溫離心半分鐘。
10. 在離心吸附柱的濾膜的中部加入 30-100 uL RNA 洗脫液,然后將離
心吸附柱套入一新的 1.5 mL 離心管中,室溫放置 2 分鐘。
11. 12000 g 室溫離心 1 分鐘,離心管中收集的樣品即為 RNA。
12. RNA 樣品可以直接用于 RT-PCR 或逆轉錄反應,也可放-80℃長期保
存。
相關資料 常見人類疾病相關 RNA 病毒
病毒 疾病名稱 類型 長度(Kb)
Measles virus measles ssRNA 4.5~85
Hepatitis A
Virus hepatitis type A ssRNA 7.5
Poliomyelitis
virus polio ssRNA 7.8
Rubella virus German measles ssRNA 7.9
Hepatitis C
Virus hepatitis type C ssRNA 9.3~9.4
Human
immunodeficien
cy virus
AIDS ssRNA 9.7
Dengue Virus dengue ssRNA 11
Yellow fever
virus yellow fever . ssRNA 11
Rabies virus rabies ssRNA 11.9
Influenza A
virus influenza ssRNA 13.5
Mumps virus mumps ssRNA 15.4
Ebola virus
virus
hemorrhagic
fever
ssRNA 19
疑難解答 Q:提取液體樣品/病毒核酸(RNA 或 DNA)為何很難?
A:原因一是量少。病毒顆粒中的 RNA 或 DNA 是作為遺傳物質保存,每
個病毒多只攜帶幾個拷貝(而一個細胞中有上萬種 RNA 分子,每種
RNA 有很多拷貝),同時其長度也十分有限(一般不到細胞基因組的萬分
之一),樣品中病毒數往往又不是很多,使得樣品中病毒核酸的量往
往比一個細胞中核酸的還少,所以操作中十分容易丟失。另外,
由于得到的核酸量很少,不能使用電泳和測 OD 檢測,只能通過
PCR 或 RT-PCR 檢測,而 PCR 或 RT-PCR 的條件又需要優化,所以
要確定提取是否成功十分不容易。